Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次显现胰脏自身抗基底到显现1同型白血病临床研究征状的重大突破率在儿童时期就有很好的说明了，多个胰脏自身抗基底形态性的儿童当中有70%在血清转换后10年内患病白血病，而随访15年的儿童这一总和增高到84%。远比之下，占临床研究1同型白血病一半以上的同型1同型白血病的发病机制还没有取得确实的数据深入研究。

越来越多的人开始用作再行管理系统来定义1同型白血病的重大突破：个基底在显现多种胰脏自身抗基底时离开第1阶段，显现血糖出现异常时离开第2阶段，显现征状时离开第3阶段。一些多发胰脏自身抗基底形态性的个基底，在1期和2期，重大突破较太快，并持续发展为发病的1同型白血病。我们前说明了了一一组在首次扫描到多种胰脏自身抗基底取样后最少10年无白血病的变太快重大突破者，这一组病变人数少，但形态更加具基底。随后，我们发现胰脏致病特异性CD8+T细胞膜自由基在重大突破比较太快的病变当中基本不实际上，但在近期发病和长期实际上的白血病病变当中很容易扫描到。这有可能算出结论，与重大突破病变远比，这些病变致病自由基的闭环增强。

早期数据深入研究算出结论，尽管闭环性T细胞膜(Treg)数量正常，但白血病病变实际上一些特性瑕疵，其当中还包括对IL-2的自由基意志力减少。此外，白血病病变当中的畸变CD4+T细胞膜有可能对闭环更加具抵抗性，体现为畸变T细胞膜的依赖性减太快，自然导致的Treg和人基底内导致的抑止Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞膜当中IL-2自由基减太快。本数据深入研究的意在是说明了了CD4+闭环性T细胞膜(Treg)在一小群极比较太快重大突破者当中的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

作法：BOX数据深入研究是一项以人群为了将的纵向数据深入研究，在21岁以下确诊的病变亲属当中检查1同型白血病的可怕因素。我们前说明了了长期比较太快重大突破者的形态，他们保持多重胰脏自身抗基底形态性超过10年，但没有显现白血病的临床研究征状，太快性或非顺利完成性致病。随后，10名在此之后保持无白血病并想要提供者大量肾脏取样的比较太快重大突破者纳入T和B细胞膜特性深入研究。在目前的数据深入研究当中，8名太快重大突破者(SP一组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身抗基底形态性。所有的组织者都西北面1同型白血病重大突破的1期，尽管一些人随后保住了胰脏自身抗基底对某些免疫的形态性自由基，然而，一名病变已经西北面2期最少6年，但没有显现临床研究征状，一名病变被诊断为白血病，该人会72岁，在捕获实验者取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究当中对该供基底顺利完成了单独评估。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，转用多参数流式细胞膜心法和T细胞膜依赖性试验评估供基底当中Treg的频率、表同型和特性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、并不一定和复归)顺利完成无督导聚类深入研究，评估Treg表同型。

结果：与有益供基底远比，来自太快重大突破基底的思绪CD4+T细胞膜的督导聚类推测，作用于的思绪CD4+ Treg频率增高，与糖皮质激素抑止的TNFR无关免疫(GITR)隐含增高有关。一名HbA1c升高的病变与重大突破比较太快者和转换的对照一组远比，Treg著者大同小异。特性深入研究算出结论，与有益供基底远比，来自比较太快重大突破基底的Treg介导的CD4+畸变T细胞膜依赖性微小损伤。体现为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的依赖性增高。

由此可知1 深入的表同型深入研究推测，CD4+Treg亚同型在太快重大突破队列当中增高。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有供基底的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标示物隐含鉴别单单10个元簇:思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用作9个有所不同Treg标示聚合的10个元簇的MST。每个结点值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，更加大的元坦克部队(10个元坦克部队)在结点一组一处打磨。每个结点当中的饼由此可知对此单个标示的隐含级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测整基底标示隐含。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)聚合由此可知，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较核素为每个metacluster筒直通由此可知(核素> 0.05%)确定为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞膜(l)。紫色白点值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加小写字母秩检查。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用作CITRUS的预测模同型证实，Treg频率的增高是重大突破比较太快的标志。分级离侄通道(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP组织者和转换的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的值得一提的是性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利完成分离，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(白点)一组以及供基底SP 606(紫色)当中CD25+ cd127的频率概要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离侄通道侄集的筒直通由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)果树簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含风速着色，标记突单单的簇被鉴别为SP和HD队列之间的有所不同。(j)筒直通由此可知推测了在SP(白点)和HD(灰点)一组当中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比较核素(总和)。(k)直方由此可知推测每个簇的表同型(红色)和Treg标示比较隐含与氛围隐含(蓝色);上列，存储器Treg_3;示意由此可知一路上，存储器Treg_4。氛围与所有其他簇当中标示的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加小写字母秩检查

由此可知3 与有益献血者远比，重大突破比较太快者思绪treg的GITR增高。每个思绪CD4+T细胞膜元簇(思绪T细胞膜_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞膜;HLA-DR + GITR +思绪T细胞膜;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个隐含标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热由此可知(sp606不还包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇当中所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含接在，推测直方由此可知(c)和概要由此可知(d)。Wilcoxon相加小写字母秩和检查，p< 0.07(紫色)所有供基底还包括，p< 0.05(蓝色)供基底SP 606和转换的HD不还包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR隐含，从分级离侄通道，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)接在，推测直方由此可知(e)和概要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加小写字母秩检查

由此可知4 来自比较太快重大突破的CD4+ treg细胞膜控制畸变CD4+T细胞膜的意志力减少。SP一组用蓝色的直通和白点对此，HD一组用红色的直通和白点对此，紫色的直通/白点对此供基底sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示为CFSE, Treg按观察的总和氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培养单单来3翌日顺利完成流式细胞膜心法扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者比较应的treg培养单单来(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培养单单来。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE依赖性总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性总和。用作形态性对照(作用于的组织起来细胞膜仅有treg)推算依赖性总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 畸变CD4+T细胞膜对比较太快重大突破的T细胞膜再造的依赖性更加敏感。SP一组用蓝色的直通和白点对此，HD一组用红色的直通和白点对此，紫色的直通/白点对此供基底sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示，treg按观察的总和氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培养单单来3翌日顺利完成流式细胞膜心法(CD25反染)和细胞膜因侄深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培养单单来。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE依赖性三份(b)。(c,d) CD25依赖性三份(c)和CD134依赖性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养单单来当中的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得单单的结论是，来自比较太快重大突破侄的再造思绪CD4+Treg在GITR隐含当中取得了扩展和丰富，强调了进一步数据深入研究Treg在1同型白血病有可能性个基底当中的表型的必要性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28