Diabetologia：激活但功能损毁的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次造显现出来去甲自身抗纤到造显现出来1同型癌症诊疗呕吐的的发展叛将在成年人中期就有很好的刻画，多个去甲自身抗纤HIV的成年人当中有70%在血液转换后10年内患有癌症，而随访15年的成年人这一%-提高到84%。比起之下，占诊疗1同型癌症一半以上的同型1同型癌症的患病选择性还没有得到必要的学练成研究。

越来越多的人开始常用分期该系统来定义1同型癌症的的发展：生殖在造显现出来多种去甲自身抗纤时进到第1前期，造显现出来浓度异常时进到第2前期，造显现出来呕吐时进到第3前期。一些多发去甲自身抗纤HIV的生殖，在1期和2期，的发展较太快，并发展为患病的1同型癌症。我们在此之后刻画了一小组在首次检测到多种去甲自身抗纤样本后至亦然多10年无癌症的亦然太快的发展者，这小组病变总数亦然多，但特征非常明确。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞加成在的发展非常太快的病变当中大体不存在，但在近期患病和长年存在的癌症病变当中很易于检测到。这可能会表明，与的发展病变比起，这些病变自身抗纤的调节增强。

早期学练成研究表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但癌症病变存在一些机制缺失，其当中除此以外对IL-2的加成控制能力增加。此外，癌症病变当中的畸变CD4+T巨噬细胞可能会对调节愈来愈具抵抗性，表现为畸变T巨噬细胞的诱发减弱，自然产生的Treg和纤外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞当中IL-2加成减弱。本学练成研究的目的是刻画了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群亦然非常太快的发展者当中的特征，他们的年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学练成研究是一项以一些人为基础的侧向学练成研究，在21岁此表确诊的病变亲属当中检测1同型癌症的危险因素。我们在此之后刻画了长年非常太快的发展者的特征，他们保持多重去甲自身抗纤HIV最多10年，但没有造显现出来癌症的诊疗呕吐，太快性或非同步进行性自身免疫。随后，10名此后保持无癌症并希望提供大量血液样本的非常太快的发展者划定T和B巨噬细胞机制研究。在迄今的学练成研究当中，8名太快的发展者(SP小组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的去甲自身抗纤HIV。所有的大多数人都处于1同型癌症的发展的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗纤对某些抗原的HIV加成，然而，一名病变已经处于2期至亦然多6年，但没有造显现出来诊疗呕吐，一名病变被确诊为癌症，该成年人72岁，在收集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究当中对该ADP同步进行了单独检验。转化外周血单个连锁加成巨噬细胞(PBMCs)，有别于多参数流式巨噬细胞练成和T巨噬细胞诱发次测试检验ADP当中Treg的频叛将、表同型和机制。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)同步进行无监督聚类研究，检验Treg表同型。

结果：与卫生ADP比起，来自太快的发展纤的思绪CD4+T巨噬细胞的监督聚类看出，启动时的思绪CD4+ Treg频叛将提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)阐释提高有关。一名HbA1c升高的病变与的发展非常太快者和反之亦然的解读小组比起，Treg小曲各有不同。机制最近，与卫生ADP比起，来自非常太快的发展纤的Treg介导的CD4+畸变T巨噬细胞诱发明显受到影响。表现为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134阐释的诱发提高。

三幅1 深入的表同型研究看出，CD4+Treg甲同型在太快的发展函数调用当中提高。由FlowSOM转化成的Treg四楼，汇聚在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物阐释鉴定造出10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;内连锁加成Treg_1;内连锁加成Treg_2;内连锁加成Treg_3;和内连锁加成Treg_4。(a)常用9个不同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个路由代表一个协同(100个协同)，愈来愈大的元协同(10个元协同)在路由小组周围上色。每个路由当中的饼三幅暗示单个上面的阐释级别。(b)每个元聚类的热三幅，以看出整纤上面阐释。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)非常原侄量为每个metacluster箱子中央线三幅(原侄量> 0.05%)确定为HD和SP小组:内连锁加成Treg_2 (e),内连锁加成Treg_3 (f),内连锁加成Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。浅蓝色左上方代表ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选小写字母秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模同型得造出假设，Treg频叛将的提高是的发展非常太快的字样。分级门控(a - f)和甜菜研究(g-k)非常SP大多数人和反之亦然的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的传奇色彩三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR阐释同步进行转化，演示FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(白斑)小组以及ADPSP 606(浅蓝色)当中CD25+ cd127的频叛将概述三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控侄集的箱子中央线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(内连锁加成Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内连锁加成Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内连锁加成Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内连锁加成T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3阐释强度着色，标记突造出的簇被识别为SP和HD函数调用间的不同。(j)箱子中央线三幅看出了在SP(白斑)和HD(灰点)小组当中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的非常原侄量(%-)。(k)直方三幅看出每个簇的表同型(粉红色)和Treg上面非常阐释与氛围阐释(粉红色);上列，内连锁加成Treg_3;示例四人，内连锁加成Treg_4。氛围与所有其他簇当中上面的阐释有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选小写字母秩检验

三幅3 与卫生献血者比起，的发展非常太快者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;内连锁加成Treg_2;内连锁加成Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个阐释上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的阐释热三幅(sp606不除此以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇当中所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR阐释串联，看出直方三幅(c)和概述三幅(d)。Wilcoxon筛选小写字母秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有ADP除此以外，p< 0.05(粉红色)ADPSP 606和反之亦然的HD不除此以外在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR阐释，从分级门控，从所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)串联，看出直方三幅(e)和概述三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选小写字母秩检验

三幅4 来自非常太快的发展的CD4+ treg巨噬细胞管控畸变CD4+T巨噬细胞的控制能力增加。SP小组用粉红色的中央线和左上方暗示，HD小组用红色的中央线和左上方暗示，浅蓝色的中央线/左上方暗示ADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按捕捉到的%-滴定。用抗CD3 /28微珠启动时巨噬细胞，人才培养3几天后同步进行流式巨噬细胞练成检测。(a-d)与CD4+；也者非常应的treg人才培养(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者人才培养。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱发%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发%-。常用HIV解读(启动时的响应巨噬细胞另有treg)计算诱发%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

三幅5 畸变CD4+T巨噬细胞对非常太快的发展的T巨噬细胞启动时的诱发愈来愈极端。SP小组用粉红色的中央线和左上方暗示，HD小组用红色的中央线和左上方暗示，浅蓝色的中央线/左上方暗示ADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按捕捉到的%-滴定。用抗CD3 /28微珠启动时巨噬细胞，人才培养3几天后同步进行流式巨噬细胞练成(CD25反染)和巨噬细胞因侄研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同人才培养。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱发调升(b)。(c,d) CD25诱发调升(c)和CD134诱发调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养当中的阐释。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

假设：我们得造出的假设是，来自非常太快的发展侄的启动时思绪CD4+Treg在GITR阐释当中得到了扩充和丰富，阐释了进一步学练成研究Treg在1同型癌症风险生殖当中的互补的前提。

原文造说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28